色譜柱固定相填充方法與技巧

色譜柱在色譜儀分析檢測(cè)過程中起著分離樣品組分的作用，其分離度直接影響色譜儀檢測(cè)的靈敏度和速率。影響色譜柱分離度的因素包括固定相和流動(dòng)相的選擇、流速和溫度的控制、理論塔板高度和塔板數(shù)、對(duì)稱因子、容量因子和選擇性因子的重復(fù)性。其中，組分在色譜柱上的分離效果,主要取決于用在填充色譜柱的固定相。

固定相填充質(zhì)量的好壞直接影響填充柱的柱效，因此，色譜柱固定相的填充方法也是很重要的。一根填充質(zhì)量較高的色譜柱，通常其理論塔板數(shù)應(yīng)該2000-3000/m，根據(jù)填充物粒度的大小，可分為濕法裝柱和干法裝柱。

    濕法裝柱是先把硅膠用適當(dāng)?shù)娜軇┌鑴蚝?，再填入柱子中，然后再加壓用淋洗?quot;走柱子"，本法的優(yōu)點(diǎn)是一般柱子裝的比較結(jié)實(shí)，沒有氣泡。   

干法裝柱則是直接往柱子里填入硅膠，然后再輕輕敲打柱子兩側(cè)，至硅膠界面下降為止，然后再填入硅膠至合適高度，后再用油泵直接抽，這樣就會(huì)使得柱子裝的很結(jié)實(shí)。接著是用淋洗劑"走柱子"，一般淋洗劑是采用TLC分析得到的展開劑的比例再稀釋一倍后的溶劑。

    濕法裝柱和干法裝柱這二者各有優(yōu)劣，不論干法還是濕法，硅膠（固定相）的上表面要平整，并且硅膠（固定相）的高度一般為15cm左右，太短了可能分離效果不好，太長(zhǎng)了也會(huì)由于擴(kuò)散或拖尾導(dǎo)致分離效果不好。為了獲得的填充密度，可選擇適當(dāng)?shù)募訅?、減壓或是手工填充的方法進(jìn)行填充色譜柱。    

（1）加壓法

    加壓法是將填充柱的一端塞好硅烷化的玻璃棉，另一端與填料池連接。先將固定相倒入填料池，填料池的另一端出口與氮?dú)饣蚩諝怃撈康臏p壓閥連結(jié)。對(duì)于常見內(nèi)徑為4.5mm的填充柱，可調(diào)節(jié)氣流為30ml/min（氣流應(yīng)隨內(nèi)徑大小作相應(yīng)調(diào)整），將填充池內(nèi)的固定相壓入填充柱中，同時(shí)用木棒輕敲填充柱體使固定相填充均勻。裝柱要求要填充得均勻，緊密，切忌有空隙。固定相填充完畢后，在原來連接填充池的一端塞上硅烷化的玻璃棉，注意這一端應(yīng)該與色譜儀的進(jìn)樣室相連接，另一端作為出口端與檢測(cè)器相連接，不能接反。 

    加壓柱是一種比較好的方法，與常壓柱類似，只不過外加壓力使淋洗劑走的快些。壓力的提供可以是壓縮空氣，雙連球或者小氣泵（給魚缸供氣的就行）。是在容易分解的樣品的分離中適用。壓力不可過大，不然溶劑走的太快就會(huì)減低分離效果。

（2）減壓法

    減壓法一般用于填充長(zhǎng)柱子。這個(gè)方法采用真空泵抽氣，將填充柱的一端塞好硅烷化的玻璃棉后與真空泵的緩沖瓶相連接。為了抽氣時(shí)潮濕空氣進(jìn)入而使固定相性能受影響，可以在填料池加入固定相后，在入氣口接氯化鈣和硅膠干燥塔，其他操作過程與加壓填充法相同。 

    減壓柱能夠減少硅膠的使用量，感覺能夠節(jié)省一半甚至更多，但是由于大量的空氣通過硅膠會(huì)使溶劑揮發(fā)（有時(shí)在柱子外面有水汽凝結(jié)），以及有些比較易分解的東西可能得不到，而且還須同時(shí)使用水泵抽氣（很大的噪音，而且時(shí)間長(zhǎng)）。

（3）手工填充法

    手工填充法一般只用于某些涂有沸點(diǎn)較低固定液的固定相的填充。通常采用邊裝邊敲打的辦法。每次加進(jìn)柱內(nèi)的填料約5cm。填充時(shí)應(yīng)注意兩點(diǎn)：一是固定相要填充均勻和緊密適度，柱內(nèi)不留有空間或者間隙；二是要避免填充過程中敲打振動(dòng)過猛，造成固定相機(jī)械粉碎。

壓力可以增加淋洗劑的流動(dòng)速度，減少產(chǎn)品收集的時(shí)間，但是會(huì)減低柱子的塔板數(shù)。所以其他條件相同的時(shí)候，常壓柱是效率的，但是時(shí)間也長(zhǎng)。