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1、血清保存的方法？

我們建議血清保存在-20℃保存。若使用不完一瓶，建議分裝于適當(dāng)?shù)娜萜鲀?nèi)冷凍備用。

2、如何解凍血清，才能其質(zhì)量不會(huì)受損？

我們建議將血清從冷凍箱取出后，置于2℃～8℃冰箱中解凍，然后在室溫下全融，解凍過程中須規(guī)則地?fù)u晃均勻。

3、為什么血清在解凍后會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀？應(yīng)該怎樣處理？

血清中絮狀沉淀產(chǎn)生的原因有很多，其中普遍的還是由于血清中脂蛋白的變性所致，而血纖維蛋白（形成的蛋白之一）在血清解凍后，也會(huì)存在于血清中，這也是造成沉淀的主要原因，但這些絮狀沉淀并不影響血清本身的質(zhì)量。欲去除沉淀，可采取自然沉降法或者將血清分裝于離心管中，2000～3000rpm離心5min。一般不建議用過濾的方法去除絮狀沉淀，因?yàn)槌恋頃?huì)阻塞濾膜，造成過濾困難或無法過濾。

4、為什么要熱滅清？有要熱滅活嗎？

加熱可以滅清中的補(bǔ)體系統(tǒng)，使補(bǔ)體去活化。通常未滅活的補(bǔ)體能夠刺激平滑肌收縮、肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放、激活細(xì)胞和噬細(xì)胞，同時(shí)還能夠參與溶解細(xì)胞的過程。

諸多研究表明大多數(shù)細(xì)胞的培養(yǎng)無須進(jìn)行血清的熱滅活；而在免疫學(xué)研究和細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)過程中，推薦使用熱滅清。實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)正確熱滅活處理的血清，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的或沒有作用，而通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率降低。并且熱處理過的血清，沉淀物明顯增多，倒置顯微鏡下觀察呈“小黑點(diǎn)”，往往會(huì)使研究者誤以為是血清受到了污染，而把血清放于37℃中，沉淀物又會(huì)更增多，有會(huì)使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂增殖。因此我們建議若非須，可以不進(jìn)行熱處理，既節(jié)省時(shí)間又質(zhì)量。

5、如何避免沉淀物的產(chǎn)生？

我們建議您在血清使用的過程中，采用正確的解凍方法（冷凍→4℃→室溫），若血清解凍時(shí)改變的溫度太大（如冷凍→37℃）容易產(chǎn)生沉淀物。溫度過高、時(shí)間過久、搖晃不均勻等，都會(huì)造成沉淀增多，我們建議如非要無須對(duì)血清進(jìn)行滅活；若須熱滅活，應(yīng)嚴(yán)格遵守56℃，30min的原則，并搖晃均勻。

四季青血清100ml多少錢，淺析影響胎牛血清質(zhì)量的幾大因素

市場(chǎng)上的胎牛血清種類繁多，魚龍混雜，很多科研工作者，是剛接觸細(xì)胞培養(yǎng)的人，分辨血清質(zhì)量的優(yōu)劣。本人根據(jù)十多年來血清生產(chǎn)銷售的經(jīng)驗(yàn)，總結(jié)如下：

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一、外觀

拿到血清，先接觸的是血清外觀，對(duì)于缺少細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)的人來說，外觀的判斷尤為重要

1、顏色

根據(jù)血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色，我國(guó)的細(xì)胞培養(yǎng)用血清標(biāo)準(zhǔn)是不高于20mg/dl，實(shí)際上，血紅蛋白含量的高低對(duì)血清并無直接影響，這個(gè)指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度，良好的操作能降低血清的溶血。國(guó)產(chǎn)血清的采血點(diǎn)很分散，大多是由屠戶采血后馬上離心收集，所以很少會(huì)有溶血，表現(xiàn)出明亮的蠟黃色，當(dāng)然，國(guó)產(chǎn)血清也很標(biāo)準(zhǔn)意義上的胎牛血清。胎牛血清或多或少總有點(diǎn)溶血，因?yàn)檎嬲奶ヅＱ骞δ懿睿t細(xì)胞容易破裂?？偟膩碚f，國(guó)產(chǎn)的血清呈現(xiàn)出蠟黃。的血清，質(zhì)量的呈現(xiàn)出談黃、微紅色，如Gibco 16000，差點(diǎn)的呈現(xiàn)出橘紅色或鮮紅色。當(dāng)然，熱滅清或保存不當(dāng)?shù)难澹捎谘t蛋白的破壞氧化，會(huì)呈現(xiàn)出暗紅，甚至咖啡色。

2、沉淀：很多血清客戶，會(huì)發(fā)現(xiàn)血清有沉淀，從而懷疑血清的質(zhì)量問題，這是沒有根據(jù)的。血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產(chǎn)生，對(duì)血清質(zhì)量沒有任何影響，沉淀的產(chǎn)生原因很多，和廠家的加工生產(chǎn)方式密切相關(guān)。國(guó)產(chǎn)的血清，大多來自北方，由于價(jià)格低廉，保存環(huán)境好，從采血、冷凍、運(yùn)輸?shù)缴a(chǎn)會(huì)經(jīng)過多次凍融，每次凍融過程，就會(huì)析出部分纖維蛋白沉淀，這樣，血清成品過濾后看起來反而更加的“干凈”，很沉淀產(chǎn)生。的胎牛血清，過濾分裝前很少會(huì)反復(fù)凍融，生產(chǎn)后的成品也是清澈的，但隨著時(shí)間的推移，血清中的大量纖維蛋白會(huì)析出形成沉淀。當(dāng)然，的牛血清，一般牛齡都在2周左右，血清中的各種蛋白含量明顯偏高，生產(chǎn)后血清可能會(huì)渾濁，甚至有大量沉淀。當(dāng)然，購(gòu)買回來的血清都是冰凍狀態(tài)，使用時(shí)需要融化，融化過程在溫度較低的狀態(tài)下慢慢進(jìn)行，否則沉淀相對(duì)較多，雖然沉淀并不直接影響血清的質(zhì)量，但對(duì)細(xì)胞的顯微觀察有的阻礙。

3、澄清度胎牛血清由于蛋白和脂類等物質(zhì)含量低，表現(xiàn)為稀薄、清淡，而國(guó)產(chǎn)血清，因?yàn)榇蠖鄶?shù)是牛血清，相對(duì)而言更加粘稠，顏色略深，這對(duì)于初步接觸血清的人很難判斷，但把兩者進(jìn)行對(duì)比，可容易分辨。

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二、主要技術(shù)指標(biāo)目前國(guó)內(nèi)血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是2005版的《中華人民共和國(guó)藥典》，主要指標(biāo)有以下幾點(diǎn)：1、內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)為不高于5EU/ml。內(nèi)毒素是細(xì)菌破碎后細(xì)胞壁的成分，因此內(nèi)毒素含量的高低可表現(xiàn)出采血到生產(chǎn)一系列過程中的操作情況。目前，國(guó)產(chǎn)血清基本這一要求，很多胎牛血清內(nèi)毒素含量反而更高，如Gibco 26140，只要求不高于50EU/ml，高出我國(guó)標(biāo)準(zhǔn)10倍，即使是16000，也要10EU/ml，血清質(zhì)量也未見影響?？梢?，內(nèi)毒素含量偏高不影響質(zhì)量，除非含量高，預(yù)示著已經(jīng)污染。2、總蛋白含量胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml，數(shù)值偏高，說明采血的牛齡偏大，不是胎牛，數(shù)值偏低，表明血清可能摻水了。3、血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl，顏色越紅，數(shù)值越高，反之，數(shù)值越低。4、pH國(guó)產(chǎn)血清，大多高于7.5，胎牛血清，大多低于7.5，具體原因未知，可能和牛齡有關(guān)，這也能用來初步鑒別血清的來源。5、微生物

包括細(xì)菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原毒等。隨著國(guó)內(nèi)血清廠家生產(chǎn)條件的，細(xì)菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制，支原體經(jīng)過0.1um過濾，大多也能清除。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴(yán)重的，主要是生產(chǎn)環(huán)境過程中帶入，又無法過濾，很難徹底清除，但對(duì)血清質(zhì)量影響不大。病原毒，是BVDV，在國(guó)產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在，這類微生物是影響國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量的重要因素之一，而胎牛血清中基本都控制的很好。

6、免疫球蛋白

國(guó)產(chǎn)血清的只是定性檢測(cè)，結(jié)果也很不準(zhǔn)確，胎牛血清大多定量檢測(cè)。免疫球蛋白的數(shù)值能體現(xiàn)出采血的時(shí)的牛齡情況，國(guó)產(chǎn)血清，基本都是牛的，血清中容易產(chǎn)生IgM，IgG的含量也偏高，胎牛血清，IgM，IgG的含量也較低。

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7、其它

不管是國(guó)產(chǎn)還是血清，都是不測(cè)生素的（無四環(huán)素胎牛血清除外）。國(guó)外，生素的使用很嚴(yán)格，用量也很少，每頭奶牛的產(chǎn)品包括血清都可以溯源的，因此可以做到胎牛血清中生素或含量低；國(guó)內(nèi)，生素的濫用已成了普遍現(xiàn)象，血清中殘留很高，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)為不利，這是國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量差的根本原因。

三、血源

市場(chǎng)上的血清血源主要分為中國(guó)、北美、南美和澳洲。

1、國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量差，這是的，主要原因并不是生產(chǎn)廠家的責(zé)任，而是天然環(huán)境差和生素的大量使用。國(guó)內(nèi)環(huán)境污染嚴(yán)重，同時(shí)飼養(yǎng)過程中生素其濫用，有毒有害物質(zhì)會(huì)大量殘留在血清中，終不利于細(xì)胞的生長(zhǎng)。

2、南美血清，來源很多，如Bioind的巴拿馬、Gibco的烏拉圭、巴西等，這些血清由于采血的不可控性，質(zhì)量參差不齊，當(dāng)然，相對(duì)于國(guó)內(nèi)血清來說好的多。另外，國(guó)內(nèi)銷售的南美血清大多顏色鮮紅，如Bioind、Gibco、Hylone等品牌，但阿根廷的血清例外，這可能和各國(guó)的采血、生產(chǎn)工藝有關(guān)。

3、北美血清，主要來自美國(guó)和加拿大，如Hclone的SH30396、SH30070、SH30071、Gibco的16000-044、26140-079等。這類血清，等級(jí)越高的顏色越淡，表現(xiàn)為淡黃中帶一點(diǎn)微紅，SH30070和SH30396對(duì)比就很明顯，特級(jí)胎牛血清基本就能進(jìn)行干細(xì)胞培養(yǎng)。北美血清還有一個(gè)顯著特點(diǎn)就是每瓶血清溯源，這對(duì)一些大型的疫苗廠、藥廠尤為重要。

4、澳洲血清，來源主要是新西蘭和澳大利亞，這是在北美血清禁運(yùn)之后進(jìn)入中國(guó)市場(chǎng)的，一般不具有溯源功能，由于生產(chǎn)、運(yùn)輸?shù)仍?，價(jià)格相對(duì)來說比較貴。