酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀(ELISA Reader)是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的儀器.可簡(jiǎn)單地

　　分為半自動(dòng)和全自動(dòng)2大類,但其工作原理基本上都是一致的,其都是一個(gè)比色計(jì),即用

　　比色法來(lái)分析原或體的含量. ELISA測(cè)定一般要求測(cè)試液的終體積在250u l以下,用

　　一般光電比色計(jì)無(wú)法完成測(cè)試,因此對(duì)酶標(biāo)儀中的光電比色計(jì)有要求.

　　酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法

　　酶標(biāo)朕免疫吸附試驗(yàn)方法簡(jiǎn)稱酶標(biāo)法,是標(biāo)記技中的一種,是從熒光體技,同位素

　　免疫技發(fā)展而來(lái)的一種敏感,特異,快速并且能自動(dòng)化的現(xiàn)代技.

　　酶標(biāo)法的基本原理是將原或體與酶用膠聯(lián)劑結(jié)合為酶標(biāo)原或體, 此酶標(biāo)原或

　　體可與固相載體上或組織內(nèi)相應(yīng)原或體發(fā)生特異反應(yīng),并牢固地結(jié)合形成仍保持的

　　免疫復(fù)合物.當(dāng)加入相應(yīng)底物時(shí),底物被酶催化而呈現(xiàn)出相應(yīng)反應(yīng)顏色.顏色深淺與相應(yīng)原

　　或體含量成正比.

　　由于此技是建立在原-體反應(yīng)和酶的催化作用的基礎(chǔ)上,因此,具有高度的靈

　　敏性和特異性,是一種富生命力的免疫學(xué)試驗(yàn)技.

酶標(biāo)儀的工作原理及結(jié)構(gòu)

　　酶標(biāo)儀實(shí)際上就是一臺(tái)變相的光電比色計(jì)或分光光度計(jì),其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)

　　和光電比色計(jì)基本相同.

　　圖示是一種單通道自動(dòng)進(jìn)樣的酶標(biāo)儀工作原理圖.光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過(guò)濾光片或單色器

　　變成一束單色光,進(jìn)入塑料微孔中的待測(cè)標(biāo)本.該單色光一部分被標(biāo)本吸收,另一部分則透

　　過(guò)標(biāo)本照射到光電檢測(cè)器上,光電檢測(cè)器將這一待測(cè)標(biāo)本不同而強(qiáng)弱不同的光信號(hào)轉(zhuǎn)換成相應(yīng)

　　的電信號(hào).電信號(hào)經(jīng)前置放大,對(duì)數(shù)放大,模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號(hào)處理后送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理

　　和計(jì)算,后由顯示器和打印機(jī)顯示結(jié)果.

　　微處理機(jī)還通過(guò)控制電路控制機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)X方向和Y方向的運(yùn)動(dòng)來(lái)移動(dòng)微孔板,從而實(shí)

　　現(xiàn)自動(dòng)進(jìn)樣檢測(cè)過(guò)程.而另一些酶標(biāo)儀則是采用手工移動(dòng)微孔板進(jìn)行檢測(cè),因此省去了X,Y

　　方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)和控制電路,從而使儀器更小巧,結(jié)構(gòu)也更簡(jiǎn)單.

　　微孔板是一種經(jīng)事先包理于放置待測(cè)樣本的透明塑料板,板上有多排大小均勻一致的

　　小孔,孔內(nèi)都包埋著相應(yīng)的原或體,微孔板上每個(gè)小孔可盛放點(diǎn)幾毫升的溶液.其常見(jiàn)

　　規(guī)格有40孔板,55孔板,96孔板等多種,不同的儀器選用不同規(guī)格的孔板,對(duì)其可進(jìn)行一孔

　　一孔地檢測(cè)或一排一排地檢測(cè).

　　酶標(biāo)儀所用的單色光既可通過(guò)相干濾光片來(lái)獲得,也可用分光光度計(jì)相同的單色器來(lái)得

　　到.在使用濾光片作濾波裝置時(shí)與普通比色計(jì)一樣,濾光片即可放在微孔板的前面,也可放在

　　微孔板的后面,其效果是相同的.下圖便是目前常用的酶標(biāo)儀光路系統(tǒng)圖.光源燈發(fā)出的光經(jīng)

　　聚光鏡,光欄后到達(dá)反射鏡,經(jīng)反射鏡作90o反射后垂直通過(guò)比色溶液,然后再經(jīng)濾光片送到

　　光電管.

　　從酶標(biāo)儀工作框圖和光路圖上可看出,它和普通的光電比色計(jì)有以下幾點(diǎn)差異:

　　(l)盛裝待測(cè)比色液的容器使用比色皿,而是使用塑料微孔板.微孔板常用透明的

　　聚乙烯材料制成,對(duì)原體有較強(qiáng)的吸附作用,故用它作為固相載體.

　　(2)由于盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線只能垂直穿過(guò),因此酶標(biāo)儀的光來(lái)都

　　是垂直通過(guò)待測(cè)溶液和微孔板的,光束既可是從上到下,也可以是從下到上穿過(guò)比色液.

　　(3)酶標(biāo)儀通常不用A,有時(shí)也使用光密度OD來(lái)表示吸光度.

　　酶標(biāo)儀可分為單通道和多通道2種類型,單通道又有自動(dòng)和手動(dòng)2種之分.自動(dòng)型的儀器

　　有X,Y方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu),可將微孔板L的小孔一個(gè)個(gè)依次送入光束下面測(cè)試,手動(dòng)型則

　　靠手工移動(dòng)微孔板來(lái)進(jìn)行測(cè)量.

　　在單通道酶標(biāo)儀的基礎(chǔ)上又發(fā)展了多通道酶標(biāo),此類酶標(biāo)一般都是自動(dòng)化型的.它沒(méi)

　　有多個(gè)光束和多個(gè)光電檢測(cè)器,如 12個(gè)通道的儀器設(shè)有 12條光束或 12個(gè)光源,12個(gè)檢測(cè)

　　器和12個(gè)放大器,在X方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)裝置的作用下,樣品12個(gè)為一排被檢測(cè).多通道酶標(biāo)

　　儀的檢測(cè)速度快,但其結(jié)構(gòu)較復(fù)雜價(jià)格也較高.

　　摘自《陜學(xué)檢驗(yàn)》1998.13(4)12

　　摘要 為酶標(biāo)儀檢測(cè)結(jié)果的室內(nèi)重復(fù)性和增強(qiáng)室間可比性，對(duì)已建立的酶標(biāo)儀性能評(píng)價(jià)與鑒定的基本方法進(jìn)行了詳細(xì)解釋和補(bǔ)充，以供同行在評(píng)價(jià)、鑒定儀器時(shí)參考與應(yīng)用。

酶標(biāo)儀的使用注意事項(xiàng)

　　1、工作環(huán)境

　　酶標(biāo)儀是一種精密的光學(xué)儀器，因此良好的工作環(huán)境不能其準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，還能夠延長(zhǎng)其使用壽命。根據(jù)DINVDE0871條例，儀器應(yīng)放置在無(wú)磁場(chǎng)和干擾電壓的位置。依據(jù)DIN45635－19條例：

　　儀器應(yīng)放置在低于40分貝的環(huán)境下。

　　為延緩光學(xué)部件的老化，應(yīng)避免陽(yáng)光直射。

　　操作時(shí)環(huán)境溫度應(yīng)在15℃－40℃之間，環(huán)境濕度在15％－85％之間。

　　操作電壓應(yīng)保持穩(wěn)定。

　　操作環(huán)境空氣清潔，避免水汽，煙塵。

　　保持干燥、干凈、水平的工作臺(tái)面，以及的操作空間。

　　2、操作注意事項(xiàng)

　　酶標(biāo)儀的功能是用來(lái)讀取酶聯(lián)免疫試劑盒的反應(yīng)結(jié)果，因此要得到準(zhǔn)確結(jié)果，試劑盒的使用須規(guī)范。許多醫(yī)院在使用酶標(biāo)儀之前是通過(guò)目測(cè)判斷結(jié)果，操作過(guò)程隨意性較大，在使用酶標(biāo)儀后如果不能及時(shí)糾正操作習(xí)慣，會(huì)造成較大誤差。在酶標(biāo)儀的操作中應(yīng)注意以下事項(xiàng)：

　　使用加液器加液，加液頭不能混用。

　　洗板要洗干凈。如果條件允許，使用洗板機(jī)洗板，避免交叉污染。

　　嚴(yán)格按照試劑盒的說(shuō)明書操作，反應(yīng)時(shí)間準(zhǔn)確。

　　在測(cè)量過(guò)程中，請(qǐng)勿碰酶標(biāo)板，以酶標(biāo)板傳送時(shí)擠傷操作人員的手。

　　請(qǐng)勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內(nèi)部，操作完成后請(qǐng)洗手。

　　如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學(xué)危害，請(qǐng)嚴(yán)格按照試

　　劑盒的操作說(shuō)明，以對(duì)操作人員造成損害。

　　如果儀器接觸過(guò)污染性或物品，請(qǐng)進(jìn)行清洗和。

　　不要在測(cè)量過(guò)程中關(guān)閉電源。

　　對(duì)于因試劑盒問(wèn)題造成的測(cè)量結(jié)果的偏差，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況及時(shí)修改參數(shù)，以效果。

　　使用后蓋好塵罩。

　　出現(xiàn)技故障時(shí)應(yīng)及時(shí)與廠家聯(lián)系，切勿擅自拆卸酶標(biāo)儀。

酶標(biāo)儀及洗板機(jī)選購(gòu)指南

酶標(biāo)儀（MicroplateReader）是對(duì)酶聯(lián)免疫檢測(cè)（EIA）實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行讀取和分析的儀器。酶聯(lián)免疫反應(yīng)通過(guò)偶聯(lián)在原或體上的酶催化顯色底物進(jìn)行的，反應(yīng)結(jié)果以顏色顯示，通過(guò)顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標(biāo)本中待測(cè)體或原的濃度。

　　酶標(biāo)儀廣泛地應(yīng)用在檢驗(yàn)、生物學(xué)研究、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)中，在近幾年中，由于大量的酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用，使得酶標(biāo)儀在生殖保健領(lǐng)域中應(yīng)用越來(lái)越廣泛，同時(shí)了生殖健康技水平。

　　目前國(guó)內(nèi)許多計(jì)生站系統(tǒng)開(kāi)展了酶測(cè)項(xiàng)目，如：乙肝五項(xiàng)、愛(ài)滋病檢測(cè)、優(yōu)育系列檢測(cè)、激素檢測(cè)等。過(guò)去多數(shù)采用目測(cè)方法，報(bào)出的結(jié)果缺乏科學(xué)的依據(jù)。例如：某弓形蟲(chóng)檢測(cè)試劑盒中，臨界值規(guī)定為：陰性對(duì)照品的OD值×2.5，通過(guò)目測(cè)無(wú)法判斷標(biāo)本孔的反應(yīng)顏色是否過(guò)臨界值。肉眼進(jìn)行兩孔之間的顏色比較可能還行，但比較一孔的顏色是否過(guò)另一孔顏色的2.5倍就不可能。

　　國(guó)內(nèi)多家機(jī)構(gòu)，如檢驗(yàn)中心和計(jì)劃生育系統(tǒng)等多次強(qiáng)調(diào)酶標(biāo)儀的重要性，并要求酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑應(yīng)使用酶標(biāo)儀判讀，酶免試劑的質(zhì)控也應(yīng)使用酶標(biāo)儀，并提供酶標(biāo)儀測(cè)定的原始數(shù)據(jù)，而各廠家的試劑盒說(shuō)明書沒(méi)有是讓用目測(cè)的。同時(shí)酶測(cè)的項(xiàng)目往往是一些實(shí)質(zhì)性的感染和病變（如：、愛(ài)滋病、優(yōu)育等），判讀更要求嚴(yán)謹(jǐn)，由誤診引起的糾紛很難處理。另外，住院病人前的丙肝、愛(ài)滋等EIA試劑檢測(cè)是避免因輸血引起感染引發(fā)的事故糾紛的要手段，正逐漸被許多單位所采用。

　　我國(guó)免疫診斷方法主要有如下三種：酶免（EIA）、放免（RIA）和發(fā)光，在市場(chǎng)上的情況如下：

　　方法所處市場(chǎng)周期

　　放免衰退期

　　酶免成長(zhǎng)期

　　發(fā)光進(jìn)入期

　　放免技由于試劑的污染和期等問(wèn)題在國(guó)際和國(guó)內(nèi)市場(chǎng)逐漸被淘汰，而化學(xué)發(fā)光試劑和設(shè)備比較昂貴，使得其在國(guó)內(nèi)的普及在計(jì)生系統(tǒng)普及需要較長(zhǎng)時(shí)間，EIA技穩(wěn)定，試劑價(jià)格合理，供應(yīng)充，酶免技在中國(guó)市場(chǎng)處于成長(zhǎng)期，因此購(gòu)買酶標(biāo)儀正合適宜。

　　尤其要提到的是，在中國(guó)的計(jì)劃生育和婦幼保健系統(tǒng)配備酶標(biāo)儀已經(jīng)迫在眉睫。早在幾年以前,世界衛(wèi)生組織已建議對(duì)孕婦進(jìn)行TORCH 五項(xiàng)常規(guī)篩查，但是遺憾的是由于缺乏酶標(biāo)儀和洗板機(jī)等設(shè)備，RCH的檢測(cè)在中國(guó)還未能普遍開(kāi)展。TORCH感染在圍產(chǎn)中稱為TORCH，由于孕婦,胎兒和兒都易被感染,它已受到婦產(chǎn)科和兒科的大重視。

　　妊娠期感染不危害母體，往往還可對(duì)胎兒和兒產(chǎn)生嚴(yán)重影響。通過(guò)可引起內(nèi)感染而導(dǎo)致流產(chǎn)、、胎或胎兒生長(zhǎng)遲緩和畸形，通過(guò)產(chǎn)道和母乳可引起兒感染。如累及經(jīng)系統(tǒng)可造成不同程度的智力障礙以及各種癱瘓、失聰ORCH感染與優(yōu)育有為重要的關(guān)系。因此，RCH（IgG和gM）檢查通常也稱為優(yōu)育十項(xiàng)檢查。目前，TORCH的檢測(cè)方法主要有放免（RIA）和酶免(EIA)。由于放免方法需要儀器，且有放射危害，目前正被酶免（EIA）方法取代。EIA方法具有特異，靈敏度高，簡(jiǎn)單快速，成本低等優(yōu)點(diǎn)，只要配備有酶標(biāo)儀和其他相應(yīng)的設(shè)備，多數(shù)普通實(shí)驗(yàn)室均可方便地開(kāi)展。很顯然,盡快在計(jì)生系統(tǒng)普及酶標(biāo)儀等設(shè)備是一個(gè)迫切的需求。

　　這項(xiàng)工作的落實(shí)將有助于水平，降低母嬰，從而整個(gè)國(guó)民的健康素質(zhì)。目前市場(chǎng)上提供的EIA試劑越來(lái)越多，如：T3、 T4、TSH、TORCH系列、系列、各種癥標(biāo)志物、傷寒、副傷寒等，另外通過(guò)母嬰傳播的性傳播(如、、HIV)和（如HBV、 HCV)，以及胎兒的體，兒TSH的測(cè)定，疫苗反應(yīng)等，市場(chǎng)上也都有成套EIA試劑盒供應(yīng)。使用酶標(biāo)儀有利于拓展檢測(cè)項(xiàng)目，檢測(cè)水平，其社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益并舉。

酶標(biāo)儀的應(yīng)用范圍

　　分類 項(xiàng)目名稱 簡(jiǎn)　稱

　　血液學(xué)檢驗(yàn) 血小板相關(guān)體的檢驗(yàn) PAIgA、PAIgG、PAIgM

　　D-二聚體的測(cè)定 D-Dimer

　　血清纖維蛋白降解產(chǎn)物的測(cè)定 FDP

　　三碘甲腺原氨酸、四碘甲腺原氨酸測(cè)定 T3、T4

　　免疫學(xué)檢驗(yàn) C反應(yīng)蛋白的測(cè)定 CRP

　　免疫球蛋白的測(cè)定 IgD、IgE

　　循環(huán)免疫復(fù)合物的測(cè)定 CIC

　　因子的測(cè)定 IgG、IgA、IgM類RF

　　甲狀腺球蛋白體、微粒體體的測(cè)定 TG、TM

　　腫免疫學(xué)檢測(cè) 甲胎蛋白的測(cè)定 AFP

　　胚原的測(cè)定 CEA

　　特異原的測(cè)定 PSA

　　胰、膽道、的測(cè)定 CA19-9

　　的測(cè)定 CA125

　　乳的測(cè)定 CA15-3

　　宮頸鱗的測(cè)定 SCC

　　多發(fā)性骨髓的測(cè)定

　　的測(cè)定 hTG

　　免疫學(xué)檢驗(yàn) 甲肝血清學(xué)的檢測(cè) H-IgM

　　乙肝血清學(xué)的檢測(cè) 兩對(duì)半

　　丙肝血清學(xué)的檢測(cè) H-IgG、HCV-IgM

　　丁肝血清學(xué)的檢測(cè) HDV-IgG、HDV-IgM

　　戊肝血清學(xué)的檢測(cè) HEV-IgG

　　腎出血熱類體的檢測(cè) HFRS-IgG

　　乙型體的檢測(cè) IgM

　　免疫缺陷體（即區(qū)滋?。┑臋z測(cè) HIV　β 2 M

　　優(yōu)育功能檢測(cè) 弓形蟲(chóng)（體）的檢測(cè) TOXO

　　風(fēng)疹的檢測(cè) RV

　　細(xì)胞的檢測(cè) CMV

　　單純的檢測(cè) HSV（Ⅰ、Ⅱ）

　　其　它 本儀器還可做基因檢驗(yàn)及獸殘、農(nóng)殘檢驗(yàn)項(xiàng)目等